灯盏花乙素苷元的微生物控制查看本领考证

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灯盏花乙素苷元的微生物控制查看本领考证

赵巩固1 周荣光1,2 杨兆祥1 王金3 袁正东2

1 昆明制药大众股份有限公司,云南方昆曲明650100; 2 昆明医中国科学技术大学学,云南方昆曲明650500;3 昆明理工科大弟子命科学与本领学院,云南方昆曲明650224

【纲要】手段:创造灯盏花乙素苷元的微生物控制查看本领。本领:按照《华夏药典》2010版诉讼要求,采用惯例法对代表性的细菌、霉菌、酵母菌进行接收率测定,并对遏制菌查管见进行本领学考证。截止:采用惯例法,5种考查菌的接收率均大于70%。结论:可采用惯例法对灯盏花乙素苷元进行微生物控制查看。

论文指导网 http://www.lvpengcheng.com/ 关键字 灯盏花乙素苷元;微生物控制查看;本领学考证

【中图分分类配号】R927 11【文件标记码】 A【作品编号】1007-8517(2015)01-0032-02

灯盏花乙素苷元又名野黄芩素,是灯盏花乙素在人体内的代谢产品,具备抗血栓、控制血小板会合、减少脑血管血流量等药理活性,其生物活性是灯盏花乙素的5倍以上[1]。灯盏花乙素苷元自然存在于灯盏花等植物中,但含量极低,不到极端之一。咱们以灯盏花素(重要成分为灯盏花乙素)为材料,采用人为半合成本领实行了灯盏花乙素苷元的批量消费[2]。本文旨在按照华夏药典的诉讼要求[3],创造灯盏花乙素苷元的微生物控制查看本领。

1仪器与材料

1 1仪器HTY-2000A集菌仪(杭州高得调理东西有限公司);盛开式集菌器(北京牛牛基因本拥有限公司);303-6B隔水式恒温培植箱(南通科学仪器厂);霉菌培植箱(上海跃进调理东西有限公)。

1 2供试样本灯盏花乙素苷元(批号:201208025、20120826、20120827,昆明制药大众股份有限公司药物接洽院)。

1 3培植基变革马丁液体培植基(批号:120327)、变革马丁琼脂培植基(批号:120319)、玫瑰红钠琼脂培植基(批号:120207)、养分肉汤培植基(批号:120122)、养分琼脂培植基(批号:111225)、胆盐乳糖培植基(批号:120415)、4-甲基伞形酮葡糖苷酸(MUG)培植基(批号120622)均由北京三药科学技术开拓公司供给。

1 4菌种枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis [CMCC(B)63501]、金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus [CMCC(B)26003]、大肠埃希菌Escherichia coli [CMCC(F)44102]、白色念珠菌Candida albicans [CMCC(F)98001]、黑曲霉Aspergillus niger [CMCC(F)98003]均由华夏方剂生物成品检定所供给。

2试验本领

2 1菌液制备辨别接种枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌的陈腐培植物至养分肉汤培植基中,于32~35℃培植24 h,用0 9%的无菌氯化钠溶液以10倍稀释法稀释至10-5~10-7,制成每1ml含菌数为50~100 cfu的菌悬液备用。

接种白色念珠菌的陈腐培植物至变革马丁培植基中,于24~26℃培植48 h,用0.9%的无菌氯化钠溶液以10倍稀释法稀释至10-4~10-6,制成每1 ml含菌数为50~100 cfu的菌悬液备用。

取黑曲霉菌的陈腐培植物至变革马丁琼脂斜面培植基中,于24~26℃培植7 d,用5ml 0 9%的无菌氯化钠溶液将孢子洗脱,取洗脱液以10倍稀释法稀释至10-4~10-6,制成每1ml含菌数为50~100cfu的菌悬液备用。

2 2供试液制备取供试样本10g于灭菌容器中,介入pH7 0无菌氯化钠-卵白胨缓冲液100 ml,混匀,得1∶10的供试液备用。

2 3菌落计数本领及考证

2 3 1菌落计数本领采用惯例法对细菌、霉菌及酵母菌进行菌落计数,经过接收率测定进行本领学考证[3]。

2 3 2接收率测定考查组:取1∶10供试液1ml、含50~100cfu考查菌的菌液1ml介入平皿中,5种考查菌每种菌平行制备2个平皿。在加有枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌菌液的平皿中,登时倾泻养分琼脂培植基,待凝结后,于32~35℃培植48 h,查看记载菌落数;在加有黑曲霉菌、白色念珠菌菌液的平皿中,登时倾泻玫瑰红钠琼脂培植基,待凝结后,于24~26℃培植72 h,查看记载菌落数。

菌液组:取含50~100cfu考查菌的菌液1ml介入平皿中,5种考查菌每种菌平行制备2个平皿。在加有枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌菌液的平皿中,登时倾泻养分琼脂培植基,待凝结后,于32~35℃培植48 h,查看记载菌落数;在加有黑曲霉菌、白色念珠菌菌液的平皿中,登时倾泻玫瑰红钠琼脂培植基,待凝结后,于24~26℃培植72 h,查看记载菌落数。

供试品比较组:取1∶10供试液1ml介入平皿中,共制备10个平皿。在5个平皿中,登时倾泻养分琼脂培植基,待凝结后,于32~35℃培植48 h,查看记载菌落数;在其余5个平皿中,登时倾泻玫瑰红钠琼脂培植基,待凝结后,于24~26℃培植72 h,查看记载菌落数。

接收率计划本领:考查组的菌接收率(%)=(考查组菌落数平衡值-供试品比较组菌落数平衡值)/菌液组菌落数平衡值×100%。

2 4遏制菌(大肠埃希菌)查看本领及考证

2 4 1遏制菌查看本领采用惯例法对遏制菌大肠埃希菌进行查看。

2 4 2遏制菌查看本领的考证考查组:取1∶10供试液10ml,含50~100 cfu大肠埃希菌的菌液1ml,介入100ml胆盐乳糖培植基中,于32~35℃培植24h。

阳性比较组:取含50~100cfu大肠埃希菌的菌液1ml,介入100ml胆盐乳糖培植基中,于32~35℃培植24h。

阴性菌比较组:取1∶10供试液10ml,含50~100 cfu金黄色葡萄球菌的菌液1ml,介入100ml胆盐乳糖培植基中,于32~35℃培植24h。

供试品比较组:取1∶10供试液10ml,介入100ml胆盐乳糖培植基中,于32~35℃培植24h。

查看本领:辨别取上述考查组、阳性比较组、阴性菌比较组和供试品比较组的培植物0 2 ml接种至装有5ml MUG培植基的试管内,32~35℃培植24h,在366nm紫外线下查看,若管内培植物展现荧光,为MUG荧光阳性;否则,为MUG荧功夫性。查看后滴加靛基质试液,若液面呈玫瑰赤色,为靛基质阳性;若液面脸色无变革,为靛基质阴性。

3截止

由表1看来,采用惯例法考证,枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉菌接收率均大于70%,证明灯盏花乙素苷元对上述5种菌株无鲜明控制效率。由表2可知,灯盏花乙素苷元的遏制菌查看可按惯例法进行。

4计划

灯盏花乙素苷元为人为半合成,不同消费工艺下获得的灯盏花乙素苷元产物,其所含杂质或溶剂残留成分常常不尽沟通,其抑菌动作或抑菌效率的强弱程度也常常不同。所以,当灯盏花乙素苷元消费工艺或本领爆发变化时,应付产物的微生物控制查看本领进行从新考证。微生物控制查看是方剂品质查看的要害实质。在人为合成药物的研制进程中,少许接洽机构或接洽职员常常只提防产物本人的化学成分品质接洽,而忽略或基础不进行产物的微生物控制查看或本领学接洽,这是不科学、不对理的。按照《华夏药典》的诉讼要求,应付用于非规则灭菌制剂的合成材料药进行微生物控制查看及本领学考证,查看名目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及遏制菌查看。

灯盏花乙素苷元对枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌和黑曲霉菌5种菌株无鲜明控制效率,可采用惯例法对其进行微生物控制查看。

论文指导网 http://www.lvpengcheng.com/参考文件

[1]车庆明,潘丽怡,陈颖,等.灯盏花乙素苷元的药动学接洽[J].华夏药学杂志,2007,42(18):1418-1421.

[2]周荣光,晏泽宇,赵巩固,等.野黄芩素的制备、纯化与构造表征[J].光谱试验室,2011,28(5):2403-2406.

[3]国度药典委员会.中华群众共和国药典(二部)[S].北京:华夏医药科学技术出书社,2010,附录:108-110.

(收稿日期:2014 10 11)

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