HPLC法测定北豆根中蝙蝠葛碱含量

>

HPLC法测定北豆根中蝙蝠葛碱含量

杜楚玲 杜憬生 邵长丽 蔡宇 黄志海

HPLC法测定北豆根中蝙蝠葛碱含量

【纲要】手段创造高效液相色谱法测定北豆根蝙蝠葛碱含量。本领色谱前提:C18柱为弥补剂,乙腈∶水∶三乙胺=45∶55∶0.1(体积分数)为震动相,检验和测定波长为284 nm,流速为1.0 mL/min,柱温为30℃。截止蝙蝠葛碱在0.4~2.0 ug范畴内灵验,进样量与峰面积呈杰出的线性接洽(r=0.999 5);宁静性考查、精细度试验、反复性考查的RSD值均小于2%;蝙蝠葛碱的平衡接收率为100.30%,RSD%=1.000%。结论该高效液相色谱法本领精巧、精确度、精细度、重现性好,操纵简单,可动作蝙蝠葛碱含量的检验和测定本领。

【 关键字】北豆根 蝙蝠葛碱 高效液相色谱法

doi:10.3969/j.issn.1671-332X.2014.09.030

北豆根为防己科植物蝙蝠葛(Menispermum Dauricum DC.)的呆板根茎,是一种常用的中药,具清热解毒、祛风止痛之工作效率,重要用于调节咽喉肿痛、肠炎痢疾、风湿痹痛[1]。北豆根的运用越来越一致,需要量也在贯穿的减少,而北豆根中含有充分的蝙蝠葛碱,蝙蝠葛碱是北豆根的重要灵验成分之一,但是对于不同产地或不同批次,北豆根中蝙蝠葛碱的含量都是纷歧样的,以是必需创造简单、灵验的高效液相色谱法对北豆根进行检验和测定[2],检验和测定北豆根所含有的蝙蝠葛碱的含量,为临床合理地运用北豆根供给了表面包车型的士按照,使蝙蝠葛碱更加合理、灵验地运用在疾病的调节上。

1仪器与试剂

1.1仪器

日本岛津高效液相色谱仪;宁波新芝生物科学技术股份有限公司超声波荡涤器(型号SB5200D);广州研创生物本领振奋有限公司C18柱(250×4.6 mm);津腾溶剂微孔过滤膜(有机膜0.45 um);上海奥豪斯仪器有限公司电子天平(型号CP124)。

1.2试剂与方剂

瑞典欧森巴克情景化学公司乙腈(GR,4L);天津市科密西化学试剂有限公司三乙胺(GR);天津市科密西化学试剂有限公司甲醇(HPLC专用);华润怡宝食物饮料有限公司怡宝纯洁水;蝙蝠葛碱规范品(广州市方剂检查所);康美药业股份有限公司北豆根(批号120904741)。

2本领与截止

2.1色谱前提

色谱柱:C18柱(广州研创生物本领振奋有限公司,250×4.6 mm);震动相:乙腈-水-三乙胺 (45∶55∶0.1);检验和测定波长:284 nm;柱温:30℃;流速为1.0 ml/min[3-4]。

2.2比较品溶液的制备

取置于五氧化二磷呆板器中呆板12 h的蝙蝠葛碱规范品精细称0.005 0 g,置于10 ml容量瓶中,用纯乙腈定容;后精细量取2 ml置于10 ml容量瓶顶用纯乙腈定容,即得0.1 mg/ml的蝙蝠葛碱规范品溶液。

2.3供试品溶液的制备

将北豆根样本妨害,取本品粉末(过三号筛)精细称定约0.200 0 g,置于具塞锥形瓶中,精细介入甲醇25 ml,密塞,称定分量,超声处置(功率250 W,频次50 kHz)30 min,取出,放冷,再称定分量,用甲醇补足减失的分量,摇匀,滤过,取续滤液,过膜,即得[5]。

2.4规范弧线绘制

精细接收蝙蝠葛碱比较品溶液4,8,12,16,20 ul进样,记载所得色谱峰面积,以峰面积(A)为纵坐标,品质(C)为横坐标,绘制规范弧线,进行回归,所得回归方程:y=895 296x-113 056。截止表白,蝙蝠葛碱在0.4~2.0 ug范畴内线性接洽杰出(r=0.999 5,n=5)。见图1、图2。

2.5本领学参观

2.5.1精细度考查

精细接收蝙蝠葛碱比较品溶液各20 ul,贯串进样5次,记载各色谱峰的峰面积,计划获得蝙蝠葛碱比较品的RSD%=1.977%,表白本考查本领精细度杰出。

2.5.2穏定性考查

精细称取批号为120904741的北豆根药材约0.200 0 g,按照“2.3”项下制备本领制备供试液,精细接收供试液20 ul,进样5次,功夫间隙为0、2、4、8、12、24 h,测定并记载蝙蝠葛碱的峰面积,截止RSD%=1.849%,表白在24 h内测定截止穏定。

2.5.3反复性考查

精细称取同一批号的北豆根药材粉末(过三号筛)约0.200 0 g,按照“2.3”项下制备本领制备供试液,精细接收供试液20 ul,反复平行测定5次,记载色谱峰,计划获得RSD%=1.240%,表白本考查本领重现性杰出。

图1蝙蝠葛碱色谱图

图2规范弧线图

2.5.4加样接收率考查

取北豆根药材粉末6份,精细称定每份约0.100 0 g,于每份样本中介入过量蝙蝠葛碱比较品

溶液,按“2.3”项下制备本领制备供试液,精细接收供试液进样领略,计划接收率,获得平衡接收率为100.30%,RSD%=1.000%,表白本试验接收率杰出[6]。

3计划

本试验参考关系文件对北豆根的震动相进行挑选,运用有不同期相比率磷酸水与乙腈,但是蝙蝠葛碱的保持功夫与其溶剂的保持功夫有重叠,两个峰无法分开,以是运用含有三乙胺和乙腈的震动相,考查了震动相为乙腈-0.05%三乙胺溶液∶45∶55,获得的谱图杰出,但保持功夫在32 min安排,功夫稍长,结果归纳保持功夫和谱图的形势,采用震动相为乙腈-水-三乙胺 (45∶55∶0.1),该震动相获得的谱图形势对称,峰形杰出,保持功夫符合。

本试验对北豆根的索取办法进行了商量,用索氏索取法索取3 h[3],获得的北豆根含量为0.42%,用超声索取法索取30 min[4],获得的北豆根含量为0.55%,且该法操纵大略,用时较短,以是试验采用超声索取法索取北豆根。

本试验经过对HPLC测定蝙蝠葛碱的震动相的挑选,对北豆根索取本领的参观,决定符合的色谱前提,而且进行了本领学参观,本领学参观符合规则,表白该高效液相色谱法本领精巧、精确度、精细度、重现性好,操纵简单,可动作蝙蝠葛碱含量的检验和测定本领。

参考文件

[1]王栋,王楠,刘岩,等.HPLC法测定北豆根总碱粉针剂中蝙蝠葛碱含量[J].中医药学报,2006,34(1):8-9.

[2]江万焯.HPLC法测定人血浆中莫西沙星的浓度[J].新颖病院,2012(12):50-55.

[3]刘威.中药材北豆根的品质与运用接洽[D].辽宁:辽宁中医药大学,2006:6.

[4]刘威,张振秋,洪涛,等.HPLC法测定北豆根中蝙蝠葛碱和蝙蝠葛苏林碱的含量[J].中药材,2005,28(9):783-784.

[5]国度药典委员会.中华群众共和国药典[M].北京:华夏医药科学技术出书社,2010:104-105.

[6]夏崇才,高运军,方明治,等. 高效液相色谱法测定癌痛宁巴布剂中乌头碱的含量[J].华夏医药导报,2013,10(31):112-114.

相关新闻